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酵母双杂交技术筛选HCV F蛋白结合蛋白基因
酵母双杂交技术 HCV F蛋白 蛋白基因
2009/7/29
目的: 丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白是一个新的HCV基因产物，其生物学特性目前尚不明确，我们应用酵母双杂交系统Ⅲ技术进行筛选F蛋白结合蛋白基因.方法: 构建F蛋白诱饵质粒，转化酵母AH109后与含肝细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合，在涂有X-gamma-gal营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)上筛选生长. 挑选蓝色克隆，提取此酵母克隆的质粒，转化大肠杆菌提取质粒D...
目的: 应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA消减文库，克隆HCV NS3蛋白反式激活相关基因.方法: 以HCV NS3表达质粒pcDNA3.1(-)-NS3转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3.1(-)为对照; 制备转染后的细胞裂解液，从中提取mRNA并合成cDNA，经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头...
实时荧光定量PCR检测血清中HCV-RNA
实时荧光定量 PCR检测 血清 HCV-RNA
2009/7/28
目的: 通过实时荧光定量PCR(FQ-PCR)与逆转录PCR(RT-PCR)两种方法检测血清HCV-RNA的结果比较，评价FQ-PCR法的临床应用价值.方法: 样本为经ELISA法筛选抗HCV阳性血清401份，其中221份采用实时荧光定量PCR法检测，180份采用RT-PCR法检测.结果: FQ-PCR法检测HCV-RNA，阳性率(≥102拷贝/mL)68.3% (151/221)，定量范围在10...
HCBP6对HCV核心蛋白反式激活作用的影响
HCBP6 HCV核心蛋白 反式激活作用
2009/7/27
目的: 研究HCBP6蛋白在细胞内表达时，是否通过蛋白-蛋白之间的相互作用，对HCV核心蛋白的反式激活作用产生影响.方法: 利用常规的分子生物学技术分别构建HCBP6蛋白和丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的真核表达载体. 酶联免疫黏附法enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测CAT的表达水平，间接测定HCV核心蛋白对于SV40病毒即刻早期启动子的反式激活活...
抗HCV树突状细胞疫苗的制备及功能研究
抗HCV树突状细胞疫苗 制备 功能研究
2009/7/23
树突状细胞(dendritic cell，DC)是目前发现的功能最强的专职抗原递呈细胞，在免疫反应中起着举足轻重的作用，因此备受重视. 1990年以来，人们在体外诱导扩增DC成功之后，克服了以往由于DC在组织中含量很少、难以获取的困难，使DC研究取得了许多突破性的进展，为人们探索新的疾病防治手段开辟了新的天地. 以下从树突状细胞的特性、体外诱生及以DC为基础的治疗性疫苗在抗HCV感染中的作用等三个...
目的: 用酵母双杂交技术筛选白细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白结合蛋白的编码基因.方法: 用多聚酶链反应(PCR)法扩增NS3基因，连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒，转化酵母细胞AH109并在其内表达，然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合，在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落，增菌后提出质粒，转化入大肠杆菌(DH5alpha)，提取质粒并测序，进行生物信...
HCV-Fc融合基因疫苗真核表达载体的构建及表达
HCV-Fc融合基因疫苗 真核表达载体 构建 表达
2009/7/23
目的:构建能表达HCV C-Fc融合基因的真核表达载体，为进一步修饰和转染树突状细胞，制备能高效表达HCV C和Fc基因的树突状细胞疫苗做准备.方法:用分别含有KpnⅠ和XholⅠ酶切位点的HCV C区基因上、下游引物，以含有HCV H株基因序列的质粒pBRTM/HCV1-3011为模板，通过PCR扩增获得HCV C区基因片段回收后，以KpnⅠ和XholⅠ双酶切，定向插入到含IgG1 Fc基因的质...
目的:研究核糖体内部进入位点(internal ribosome entry site,IRES)特异性抑制性RNA (inhibitor RNA,IRNA)细胞内对丙型肝炎病毒(HCV) IRES介导蛋白翻译的抑制作用.方法:体外应用脂质体细胞转染法,将IRNA及其突变体mIRNA真核表达载体pcRz-IRNA/pcRz-mIRNA转染人肝癌细胞株（HHCC），经G418筛选4 wk后建立IRN...
酵母双杂交技术筛选人胰腺细胞中HCV 1b NS3结合蛋白基因
酵母双杂交技术 人 胰腺细胞
2009/6/25
目的: 应用酵母双杂交技术筛选人胰腺cDNA文库中与HCV 1b亚型非结构蛋白NS3相互作用的结合蛋白的编码基因, 为进一步研究HCV影响糖、脂代谢机制奠定实验基础. 方法: 扩增人胰腺cDNA文库并纯化鉴定, 纯化后的文库质粒转化酵母菌Y187; 构建诱饵质粒PGBKT7-NS3并转化酵母菌AH109, 在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落. 应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH1...
表达HCV NS3蛋白肝细胞中ERK与NF-κB信号转导通路间的cross-talk研究。
摘要 为探讨ＨＣＶ／ＨＢＶ 复合疫苗的可行性，将合成的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）复合多表位抗原基因ＰＣＸ与ＨＢｓＡｇ 基因连接成ＰＣＸＳ基因，与β－半乳糖苷酶（ＧＺ）基因融合后在大肠杆菌及减毒鼠伤寒沙门氏菌中获得表达．目的蛋白ＧＺ－ＰＣＸＳ可被抗－ＨＢｓ 及抗－ＨＣＶ 抗体所特异识别．ＧＺ－ＰＣＸＳ抗原皮下注射免疫ＩＣＲ小鼠后，诱发了较高水平的抗－ＧＺ－ＰＣＸＳＩｇＧ反应．构建的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌...
利用合成肽进行丙型肝炎病毒(HCV)的线性抗原表位分析
丙型肝炎病毒 常规肽与工程肽 ＥＬＩＳＡ 抗原表位筛选
2007/12/18
摘要 首先利用固相多肽合成技术对ＨＣＶ多蛋白中可能含有优势抗原表位的１４个肽段进行了化学合成，并用合成肽作包被抗原进行间接ＥＬＬＳＡ试验来分析它们的抗原性，结果表明，所有合成肽中除ＮＳ３区的Ｐ７、Ｐ８和ＮＳ５区的Ｐ１３无抗原性外，其余肽段均具有抗原活性，其中Ｃ区的Ｐ１，ＮＳ４区和Ｐ９和ＮＳ５区的Ｐ１２三个肽段的抗原性较好，与相应的重组蛋白Ｃ２２，Ｃ１００和ＮＳ５Ａ比较，它们之间的抗原性比较接近，随...
“丙型肝炎病毒（HCV）：感染模型与诊断技术”学术研讨会在沪举行
2007/8/8
“丙型肝炎病毒（HCV）：感染模型与诊断技术”学术研讨会在沪举行
“丙型肝炎病毒（HCV）：感染模型与诊断技术”学术研讨会于2007年3月20日在上海举行。闻玉梅院士、赵国屏院士，第二军医大学微生物学教研室主任戚中田教授以及来自全国高校、中科院有关研究所、上海市科研单位等四十多位专家学者出席了会议。研讨会上，专家们就丙型肝炎病毒(HCV)：感染模型与诊断技术； 丙型...
Determination of HCV Genotypes in Iranian Isolates by PCR-RFLP
Hepatitis C Virus Genotyping PCR RFLP Iran
2010/2/3
Hepatitis C is a major cause of liver related morbidity and mortality worldwide and represents a major public health problem. Depending on genomic organization, the virus is divided into six genotypes...