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DNA甲基化是指DNA甲基转移酶(DNMT)将DNA序列中的5′胞嘧啶转变为5′甲基胞嘧啶的化学修饰, 可以调控基因的时空特异性表达, 从而影响细胞命运决定和分化等生物学过程。近年来研究发现, DNA甲基化在脊椎动物胚胎早期发育中有重要作用, Dnmt基因的缺失会影响胚胎早期发育和多个器官的形成及分化, 如胚胎早期致死、内脏器官和神经系统终末分化缺陷以及血液发生紊乱等。文章总结了DNA甲基化转移酶...
应用微卫星DNA标记探讨我国长江中下游地区湖北钉螺群体遗传结构
湖北钉螺 微卫星DNA 群体遗传差异
2012/10/15
应用微卫星DNA分子标志分析中国长江中下游地区湖北钉螺群体的遗传结构。 方法 利用6对微卫星DNA引物，对采集自湖沼型血吸虫病流行区的湖南汉寿县、湖北阳新县、江西星子县、安徽当涂县和江苏扬州邗江区的湖北钉螺的P84、T5-13、T5-11、T4-22、T6-27和P82等6个位点进行荧光标记通用引物PCR扩增。每个采集点采集20～50个钉螺标本，共165个。统计分析各群体的等位基因数（Na）、...
应用噬菌体展示技术筛选HBV前-S1蛋白反式激活基因1（PS1TP1）的启动子DNA结合蛋白，进一步阐述PS1TP1在慢性乙型肝炎发病机制中的作用。方法 根据注册入GenBank的PS1TP1启动子DNA序列设计引物，运用PCR技术以人基因组DNA为模板，扩增得到获得PS1TP1启动子的DNA片段，并通过亚克隆方法建构建真核报告载体pCAT3-PS1TP1p，之后转染HepG2细胞系，采用酶联免...
探究中药酚酸类化合物抑制DNA损伤的效应,分析其构效关系。方法 以人工合成抗氧化剂水溶性维生素E Trolox为阳性对照,选取结构相近的没食子酸、咖啡酸、芥子酸、阿魏酸和对香豆酸5种天然酚酸类化合物,通过琼脂糖凝胶电泳检测其体外清除羟自由基、过氧自由基及过氧亚硝基阴离子从而抑制DNA氧化损伤的作用。对电泳结果进行吸光度分析,计算开环态DNA所占百分比,由此得出各化合物的IC50值。结果 5种酚酸类...
比较线粒体DNA(mtDNA)缺失A549细胞(Rho0细胞)与其母本细胞(Rho+细胞)核蛋白表达谱, 并探讨细胞核对线粒体功能缺陷的应答反应。方法 二维凝胶电泳(2-DE)和表面增强激光法解吸电离-飞行时间(SELDI-TOF)蛋白芯片测定Rho0细胞和Rho+细胞核蛋白表达谱,基质辅助激光解吸电离-飞行时间(MALDI-TOF)质谱结合数据库检索鉴定差异表达的蛋白点,Western印迹法测定...
哺乳动物转录因子DNA结合谱
哺乳动物转录因子 DNA结合谱 DNA微阵列芯片 高通量DNA测序
2013/7/22
基因差异表达是生物发育和对刺激作出应答的分子基础, 转录因子在这种基因差异表达中发挥着重要的调控作用。因此, 要弄清楚转录因子调控基因差异表达的机理, 就必须鉴定出它们全部的靶基因并构建其操纵的转录调控网络。对基因组DNA的序列特异性结合是转录因子调控基因转录的关键环节, 因此, 要鉴定转录因子的靶基因, 就必须从它们与DNA相互作用的分子水平, 鉴定它们能够识别并结合的全部DNA序列, 即转录因...
观察中药活性成分苦柯胺B（kukoamine B,KB）体内外拮抗脓毒症的药理活性。 方法 采用双偏振极化干涉测量技术测定KB与大肠埃希氏菌LPS、CpG ODN 1826的亲和力，并用鲎试剂法检测KB对大肠埃希氏菌LPS的体外中和作用，采用ELISA法体外检测KB对LPS和CpG DNA单独刺激RAW 264.7细胞释放炎症介质TNF-α和IL-6的抑制作用，ELISA法检测...
研究日本血吸虫中国大陆株23 kD 膜蛋白-热休克蛋白(SjC23-Hsp70)DNA 疫苗联合佐剂白细胞介素12(IL-12) 质粒DNA 对水牛的免疫保护作用。方法:将血吸虫病非流行区8~10 月龄健康水牛45 头随机分为A组(SjC23-Hsp70+IL-12)、B 组(SjC23+IL-12) 和C 组(pVAX+IL-12),每组15 头。每头牛经肩部肌注免疫3 次,每次间隔28 d。末...
观察HSP65 DNA、Ag85A DNA、Ag85A DNA联合利福平、Ag85A/ESAT-6嵌合DNA、Ag85A/ESAT-6嵌合DNA联合利福平对感染结核分枝杆菌耐药株小鼠治疗后的肺、肝、脾脏病理组织学变化，研究和评价该DNA疫苗治疗效果。方法 将用结核分枝杆菌高耐利福平低耐异烟肼临床分离株HB361尾静脉注射17~19 g的6~8周龄雌性BALB/c小鼠随机分为8组，每组10只。感染后...
食管鳞癌染色体及基因组DNA畸变研究进展
食管鳞癌 染色体 基因组DNA 畸变
2013/7/22
食管鳞癌是我国常见的消化道恶性肿瘤, 进展快且预后差。由于早期一般无明显症状, 临床确诊的食管鳞癌大多已发展到了中晚期, 治愈难度较大。越来越多的证据表明, 在食管鳞癌发生发展过程中, 染色体及基因组DNA畸变均是最常见的遗传学改变。文章就食管鳞癌染色体及基因组水平异常的研究进展作一综述。
探讨纳米氧化锌对人正常肝细胞HL7702的细胞毒性和遗传毒性作用。方法 纳米氧化锌10, 25, 50, 75和100 mg·L-1培养HL7702细胞12, 24和48 h。MTT法检测进行毒性评级(RGR)。单细胞凝胶电泳测定细胞头部DNA百分率、尾部DNA百分率、尾矩和Olive尾矩；微核试验测定微核率。结果 纳米氧化锌对HL7702肝细胞的半数抑制浓度(IC50)为29.81 mgL-1。...
大肠杆菌表达的Taq DNA聚合酶的纯化
Taq DNA 聚合酶 724树脂 阳离子交换层析
2013/7/25
Taq DNA聚合酶是分子生物学研究中最常用的热稳定DNA聚合酶之一, 与其他热稳定DNA聚合酶具有相似的特征, 其纯化策略不但有潜在的应用前景, 也对同类聚合酶的分离具有指导意义。已报道的适宜大量制备Taq酶的方案所需成本较高, 而文章介绍了一种利用国产阳离子交换树脂廉价制备Taq酶的方案。在本方案中, 采用热变性、(NH4)SO4沉淀与724离子交换层析分离大肠杆菌表达的Taq酶, 约18 g...
2011年1月5日，清华大学医学院颜宁教授的研究组、生命学院施一公教授的研究组，与美国普渡大学朱健康教授合作在国际顶尖期刊《科学》在线发表论文，报道转录激活因子样效应蛋白（TALE）特异识别DNA的分子机理。
农杆菌介导的遗传转化已被广泛应用于植物转基因研究。作为外源基因的载体, 农杆菌T-DNA片段在植物基因组中的整合方式, 不仅影响外源基因的整合效率及稳定性, 还会影响外源基因的表达特性。文章就农杆菌介导的T-DNA整合的两种主要模式、规律及相关研究手段进行综述, 为农杆菌介导的转基因及T-DNA插入突变等相关研究提供借鉴。