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猪圆环病毒3型微滴数字PCR定量检测方法的建立
猪圆环病毒3型 微滴数字PCR 检测方法
2019/3/19
猪圆环病毒3型是一种新型猪圆环病毒，可引起猪感染相关疾病。本实验根据猪圆环病毒3型的OPF2基因序列，设计引物探针，建立了可对其准确定量检测的微滴数字PCR(droplet digital PCR，ddPCR)方法。通过对ddPCR反应体系中的引物探针浓度和退火温度进行优化，得到ddPCR反应的最佳引物探针浓度比为800 nM: 800 nM: 400 nM；最佳退火温度为60 ℃。该ddPCR方...
基于内参的副溶血性弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立
IAC 食源性致病菌 食品安全
2015/11/16
建立基于内参的副溶血性弧菌实时荧光定量PCR方法,快速检测样品中的副溶血性弧菌。方法 根据GenBank已公布的副溶血性弧菌基因组序列,筛选特异性靶基因,设计特异性引物探针,优化反应体系,并在体系中加入内参(IAC),通过标记不同荧光基团的TaqMan探针来监测IAC,进而实时监控整个PCR反应。按照5～50 cfu/25 g的细菌量人工污染样品,以评价所建立反应的体系。结果 以副溶血性弧菌基因组...
应用PCR-DGGE对巴氏消毒乳中腐败细菌的污染溯源研究
PCR-DGGE 巴氏杀菌乳 腐败微生物 污染溯源
2016/6/29
运用PCR-DGGE技术分析了巴氏杀菌乳从原料乳到杀菌、灌装这两个加工关键控制点的微生物动态变化和差异性,容易发生污染的环节是挤乳环节、杀菌后的加工管道和包装环节。原料乳中易携带的细菌是乳酸链球菌(Lactococcus lactis subsp.)和乳酸杆菌(Lactobacillus sp.);挤乳环节中易受无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)污染;杀菌后的加工管道易...
荧光PCR检测副溶血性弧菌致病基因方法的建立
食源性致病菌 致病基因 食品安全
2015/11/24
建立一种准确、快速、特异地检测副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)致病基因的荧光PCR方法。方法 用7株已知其致病基因的VP标准菌株和检出菌分别对6种VP致病基因荧光PCR检测文献方法和本文建立的方法进行验证比较,并用6种常见食源性病原菌对新建方法的特异性进行检验。结果 所建方法能够同时检测VP的3种溶血素,其检测结果与菌株的溯源结果及普通PCR结果完全一致,且与常...
实时荧光PCR在食源性致病菌监测中的应用研究
分子信标探针 食品安全 监测
2015/12/23
建立沙门菌、志贺菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠埃希菌O157 :H7、金黄色葡萄球菌5种致病菌的实时荧光PCR检测方法，并在食源性致病菌监测工作中推广应用。方法 将菌株及样品经培养基增菌后，用热裂解法提取DNA，使用荧光定量PCR反应试剂盒，对该检测方法进行特异性的验证，并在2006—2007年间，同时应用实时荧光PCR和传统方法对890份各类实际工作监测标本进行比较分析。结果 实时荧光PCR方法...