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基因差异表达是生物发育和对刺激作出应答的分子基础, 转录因子在这种基因差异表达中发挥着重要的调控作用。因此, 要弄清楚转录因子调控基因差异表达的机理, 就必须鉴定出它们全部的靶基因并构建其操纵的转录调控网络。对基因组DNA的序列特异性结合是转录因子调控基因转录的关键环节, 因此, 要鉴定转录因子的靶基因, 就必须从它们与DNA相互作用的分子水平, 鉴定它们能够识别并结合的全部DNA序列, 即转录因...
植物AP2/ERF是一个庞大的转录因子基因家族, 含有由60~70个氨基酸组成的AP2/ERF结构域而得名, 存在于所有的植物中。AP2/ERF转录因子参与多种生物学过程, 包括植物生长、花发育、果实发育、种子发育、损伤、病菌防御、高盐、干旱等环境胁迫响应等。AP2/ERF类转录因子参与水杨酸、茉莉酸、乙烯、脱落酸等多种信号转导途径, 而且是逆境信号交叉途径中的连接因子。文章对国内外近年来有关植物...
爪蟾是重要的生物医学模式动物。文章根据NCBI公布的热带爪蟾(Xenopus tropicalis)基因组数据, 利用生物信息学方法提取和鉴定了爪蟾全基因组范围的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)基因信息, 应用系统发生方法进行分类并做基因本体论(Gene Ontology, GO)功能富集分布分析, 以期从整体上探讨爪蟾bHLH转录因子基因家族的分类及功能。结果表明, 在热带爪蟾基因组数据库中发现了...
稻瘟菌为了实现对水稻的有效侵染, 在侵染水稻时可能通过表达和转运一定数量的效应蛋白进入到水稻细胞, 抑制和干扰水稻的先天免疫机制。文章利用Solexa第二代测序技术, 通过开展水稻和稻瘟菌互作早期转录组的测定和分析, 克隆和鉴定在互作早期表达的稻瘟菌效应蛋白基因。利用序列同源比对, 我们从总计约12.5 M条序列标签中, 分离和鉴定了338 942条来源于稻瘟菌的序列, 并最终定位到779个稻瘟菌...
SV40 PolyA(猴空泡病毒PolyA, 简称PolyA)序列是有转录终止作用和使转录的mRNA添加PolyA尾的DNA序列(240 bp), 含有AATAAA六核苷酸多腺苷化信号(Polyadenylation signal)。在pEGFP-C1质粒的GFP基因下游插入14个同向串联的Alu序列(Alu14), 构建pAlu14质粒, 瞬时转染HeLa细胞, 用Northern blot检测...
随着DNA测序技术的发展, 新一代测序技术以其高通量、低成本的特点, 成为越来越多的生物学研究者在开展工作时的首选。在所有的新一代测序技术中, 454测序系统是最早实现商业化且发展相对成熟的一种, 目前被广泛的应用于各个领域的生物学研究中。文章以454测序系统为例, 综述了新一代测序系统的原理、优缺点, 及其在植物转录组研究中的应用, 并对其在植物研究领域中可能的发展应用方向进行了展望。
哺乳动物精子发生于睾丸的生精小管, 是一个高度复杂的细胞分裂和分化过程, 涉及到错综复杂的基因表达调控过程, 包括转录转录后水平的调控, 其中任何一个环节出错都可能导致雄性不育。因此, 揭示精子发生过程中的分子调控机理, 对发现新的男性避孕方法及治疗不育症有重要意义。文章重点综述了近年有关雄激素及其受体、雌激素及其受体、转录因子和染色质相关因子在精子发生转录水平调控的研究进展。
转录组是特定组织或细胞在某一发育阶段或功能状态下转录出来的所有RNA的集合。转录组研究能够从整体水平研究基因功能以及基因结构, 揭示特定生物学过程以及疾病发生过程中的分子机理。RNA-Seq作为一种新的高效、快捷的转录组研究手段正在改变着人们对转录组的认识。RNA-Seq利用高通量测序技术对组织或细胞中所有RNA反转录而成的cDNA文库进行测序, 通过统计相关读段(reads)数计算出不同RNA的...
目的:探讨心肌细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)变化对锌指转录因子及胚心标志基因的影响。 方法: 以原代培养的乳鼠心肌细胞为模型,血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及雷尼丁(RY)剌激心肌细胞跨膜钙内流及细胞内钙释放; Fura-2/AM比率荧光成像系统分析细胞内钙信号;免疫印迹(Western blotting)检测心肌细胞钙调神经磷酸酶(CaN)、活化T细胞核因子(NFAT3)、锌指转录因子(GAT...
目的:研究bHLH家族基因中c-myc和mad1对人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子的转录调节。 方法: 采用脂质体DOTAP转染法将装载有虫荧光素酶基因的野生型hTERT启动子(Tw)和突变型hTERT启动子(Td)质粒,与含c-myc或mad1基因的质粒,以不同方式组合分别转染至膀胱癌T24细胞、EJ细胞、猴肾母COS-7细胞和人成纤维细胞,培养48 h后检测各组虫荧光素酶活性。 结果: 在...
目的:建立STEAP1基因的体外转录模型,为进一步研究其功能奠定基础。 方法:应用RT-PCR的方法从前列腺癌组织中钓取STEAP1全长cDNA,TA克隆后测序,亚克隆入pSP64载体,构建体外转录用载体STEAP1-pSP64。同时,通过PCR构建具有SP6 RNA聚合酶结合位点的STEAP1体外转录盒。应用体外转录试剂盒,对比STEAP1-pSP64与STEAP1体外转录转录效率。结果:(1...
目的:克隆纤维连结蛋白(FN) 启动子和检测其转录活性,并初步研究增加SV40增强子对其转录活性的影响。方法:从正常人gDNA中克隆FN启动子,驱动氯霉素乙酰转移酶报告基因表达,构建成有SV40增强子和无SV40增强子两个重组体报告载体。利用脂质体介导的转染技术导入HT1080细胞,检测各重组体的瞬时表达,确定克隆FN启动子转录活性和SV40增强子对其转录活性的影响。 结果:克隆的FN启动子在HT...
转化生长因子beta 1是一种多功能的细胞活性调节因子,TGF-beta1失调在多种疾病的形成中发挥重要作用,在不同的组织器官和不同的疾病进程中其作用不同,调节不同组织中TGF-beta1蛋白的表达对于疾病的治疗有重要意义,TGF-beta1基因启动子序列的成功克隆为在分子水平了解这种蛋白的调节机制提供了基础. 现就TGF-beta1基因启动子的结构、顺反式作用因子、细胞因子反应元件以及其基因多态...
背景与目的:构建NGAL 基因5’侧翼区转录调控元件萤火虫荧光素酶报告基因表达载体。材料与方法:以PCR法从SHEEC食管癌细胞基因组DNA中扩增NGAL基因5’侧翼转录调控区不同长度片段G0~G6(-1431~+84)。 PCR产物经pGEM-T easy转载,再定向亚克隆插入pGL3-Basic。重组子通过特异限制性内切酶切割,琼脂糖电泳予以鉴定。结果:成功构建NGAL 基因5’侧翼区转录调控...

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